د الټرا فلټریشن سینټرفیوج ټیوب کارول او احتیاطي تدابیر
1) یو مناسب الټرا فلټریشن ټیوب غوره کړئ.په یاد ولرئ چې د UF غشا مختلف کیمیاوي موادو ته د دوی د زغم په کچه کې توپیر لري.په عموم ډول، د 10 kDa مالیکولر وزن کټ آف سره د الټرا فلټریشن ټیوبونه د مالیکولر وزن کټ آف سره غوره کیدی شي چې باید د ګټو پروټین مالیکولر وزن 1/3 څخه ډیر نه وي ، لکه 35 kDa.که چیرې د ګټو پروتین مالیکولر وزن شاوخوا 10 kd وي، د 3 KD مالیکول وزن کټ آف سره د الټرا فلټریشن ټیوب کارول کیدی شي.
(2) الټرا فلټریشن، تازه اخیستل شوی، وچ دی، د کارولو دمخه د الټرا پاکو اوبو سره اضافه کیږي او اوبه په بشپړه توګه د جھلی، یخ حمام یا یخچال څخه تیریږي د څو دقیقو لپاره پری یخ شوي.بیا اوبه اچول کیږي، د بیلګې په توګه د پروټین مایع، او څومره چې اضافه کیږي، کوم چې د تیوب په پورتنۍ برخه کې د سپینې کرښې څخه زیات نه وي.عملیات روښانه دي، او د الټرا فلټریشن ټیوب باید د پروټین محلول اضافه کولو دمخه په یخ کې پری یخ شي.
3) د ثقل ډله او مرکز دواړه باید توازن ته ورسیږي.په یاد ولرئ چې د ګرځیدو سرعت او سرعت خورا ګړندی نه دی ، که نه نو مستقیم د الټرا فلټریشن جھلی ته زیان رسوي.سنټرفیوګال الټرا فلټریشن پیل شو (سنټرفیوژ تر 4 درجو پورې پریکول شوی).وروسته له دې چې د مختلفو سنټرفیوجونو RPM په g بدل شو، دا توپیر درلود.د سینټرفیوج سرعت لږترلږه سره تنظیم شوی و، په جھلی باندې فشار کموي.په یاد ولرئ، ډاډه اوسئ چې سنټرفیوج وروسته له هغه پریږدئ چې سنټرفیوج خپل منزل سرعت ته ورسیږي، یا که تاسو کومه ستونزه لرئ، تاسو نشئ کولی دا د لومړي ځل لپاره اداره کړئ.سپینډل ته د غشا اړخ د لارښوونو سره سم تنظیم شوی و (د زاویه سینټرفیوج قضیه د محور عمودی غشا ده).په عملي کارونې کې ، د عمومي گردش سرعت د لارښوونو په پرتله ټیټ دی ، نو د سینټرفیوج ټیوب ژوند اوږدول کیدی شي.
3) د ثقل ډله او مرکز دواړه باید توازن ته ورسیږي.په یاد ولرئ چې د ګرځیدو سرعت او سرعت خورا ګړندی نه دی ، که نه نو مستقیم د الټرا فلټریشن جھلی ته زیان رسوي.سنټرفیوګال الټرا فلټریشن پیل شو (سنټرفیوژ تر 4 درجو پورې پریکول شوی).وروسته له دې چې د مختلفو سنټرفیوجونو RPM په g بدل شو، دا توپیر درلود.د سینټرفیوج سرعت لږترلږه سره تنظیم شوی و، په جھلی باندې فشار کموي.په یاد ولرئ، ډاډه اوسئ چې سنټرفیوج وروسته له هغه پریږدئ چې سنټرفیوج خپل منزل سرعت ته ورسیږي، یا که تاسو کومه ستونزه لرئ، تاسو نشئ کولی دا د لومړي ځل لپاره اداره کړئ.سپینډل ته د غشا اړخ د لارښوونو سره سم تنظیم شوی و (د زاویه سینټرفیوج قضیه د محور عمودی غشا ده).په عملي کارونې کې ، د عمومي گردش سرعت د لارښوونو په پرتله ټیټ دی ، نو د سینټرفیوج ټیوب ژوند اوږدول کیدی شي.
(4) کله چې پاتې 1ml ته متمرکز شي، د بفر محلول 50ul واخلئ، 10ul د جریان جریان اضافه کړئ او وګورئ چې ایا کوم نیلي رنګ شتون لري، د قضاوت په توګه چې د الټرا فلټریشن ټیوب کې پروټین شتون نلري.که ټیوب لیک شوی وي ، پورتنۍ طبقه بیا واچوئ او نوي ټیوب ته د الټرا فلټریشن پیل کولو لپاره جریان ورکړئ.د دقیق معلومولو لپاره که ټیوبونه ورک شوي وي، د 10 دقیقو لپاره سینټرفیوج د 5mgml BSA سره د جریان څخه دمخه، د پروټین ګلو یا د براډفورډ خام اسیس سره چلول، او د پاتې متمرکز پروټین محلول (کوم چې په یخ کې کار کوي او د پروټین د تودوخې څخه مخنیوی کوي) اضافه کولو سره دوام وکړي. ټول تمرکز اضافه شوی.د سینټرفیوګریشن په وخت کې پاملرنه وکړئ که چیرې د پروټین باران واقع شي چې د تیوب بندیدو لامل کیږي.که باران واقع شي، معلومه کړئ چې آیا د اورښت ځانګړی لامل د پروټین ډیر غلظت یا نامناسب بفر دی؛پخوانی په یو وخت کې د څو الټرا فلټریشن ټیوبونو د الټرا فلټریشن لخوا حل کیدی شي ، غلظت کموي ، او وروستی د مختلف بفر محلولونو تبادله کولو سره تر هغه چې د پروټین هیڅ ورښت واقع نشي.
(4) کله چې پاتې 1ml ته متمرکز شي، د بفر محلول 50ul واخلئ، 10ul د جریان جریان اضافه کړئ او وګورئ چې ایا کوم نیلي رنګ شتون لري، د قضاوت په توګه چې د الټرا فلټریشن ټیوب کې پروټین شتون نلري.که ټیوب لیک شوی وي ، پورتنۍ طبقه بیا واچوئ او نوي ټیوب ته د الټرا فلټریشن پیل کولو لپاره جریان ورکړئ.د دقیق معلومولو لپاره که ټیوبونه ورک شوي وي، د 10 دقیقو لپاره سینټرفیوج د 5mgml BSA سره د جریان څخه دمخه، د پروټین ګلو یا د براډفورډ خام اسیس سره چلول، او د پاتې متمرکز پروټین محلول (کوم چې په یخ کې کار کوي او د پروټین د تودوخې څخه مخنیوی کوي) اضافه کولو سره دوام وکړي. ټول تمرکز اضافه شوی.د سینټرفیوګریشن په وخت کې پاملرنه وکړئ که چیرې د پروټین باران واقع شي چې د تیوب بندیدو لامل کیږي.که باران واقع شي، معلومه کړئ چې آیا د اورښت ځانګړی لامل د پروټین ډیر غلظت یا نامناسب بفر دی؛پخوانی په یو وخت کې د څو الټرا فلټریشن ټیوبونو د الټرا فلټریشن لخوا حل کیدی شي ، غلظت کموي ، او وروستی د مختلف بفر محلولونو تبادله کولو سره تر هغه چې د پروټین هیڅ ورښت واقع نشي.
(5) لومړی څو مرحلې د پروټین د تمرکز لپاره کارول کیږي، او که چیرې بفر بدل شي، نو په نرمۍ سره نوی بفر (د 0.22um الټرا فلټریشن جھلی له لارې الټرا فلټریشن) د ټول پروټین شاوخوا 1ml ته اضافه کړئ، او د دریو لپاره شاوخوا 1ml ته بیا تمرکز وکړئ. په پرله پسې وختونو کې، د مطلوب پروټین غلظت پورې اړه لري د وروستي متمرکز وروستي حجم سره، په عموم ډول د 500ul څخه ډیر نه، بلکې د 200ul دننه هم.په دریو وختونو کې 1000 × یا ډیر ترلاسه کړئ، په اصل کې د بفر بدلون په توګه، لکه څنګه چې هر ځل لږ تر لږه 10 × یا ډیر حجم بډایه حساب شوي.
(5) لومړی څو مرحلې د پروټین د تمرکز لپاره کارول کیږي، او که چیرې بفر بدل شي، نو په نرمۍ سره نوی بفر (د 0.22um الټرا فلټریشن جھلی له لارې الټرا فلټریشن) د ټول پروټین شاوخوا 1ml ته اضافه کړئ، او د دریو لپاره شاوخوا 1ml ته بیا تمرکز وکړئ. په پرله پسې وختونو کې، د مطلوب پروټین غلظت پورې اړه لري د وروستي متمرکز وروستي حجم سره، په عموم ډول د 500ul څخه ډیر نه، بلکې د 200ul دننه هم.په دریو وختونو کې 1000 × یا ډیر ترلاسه کړئ، په اصل کې د بفر بدلون په توګه، لکه څنګه چې هر ځل لږ تر لږه 10 × یا ډیر حجم بډایه حساب شوي.
د پوسټ وخت: نومبر-09-2022